Федеральное государственное бюджетное учреждение науки

ИНСТИТУТ БИОЛОГИИ РАЗВИТИЯ им. Н.К. Кольцова РАН
Koltzov Institute of Developmental Biology of Russian Academy of Sciences

Лаборатория КЛЕТОЧНОЙ БИОЛОГИИ

Методы и техническое оснащение

В лаборатории реализованы все основные подходы и направления клеточных технологий: выделение, культивирование и криоконсервирование субстрат-зависимых первичных культур и клеточных линий, а также большинство современных методов анализа отдельных клеток и клеточных популяций. Нами разработано несколько оригинальных моделей позволяющих выявить роль пролиферации, миграции, межклеточных взаимодействий и взаимодействий с матриксом в образовании структур эпидермиса. Для получения трансформированных клеточных линий, или клеток с флуоресцентной меткой используются генетические конструкты на основе лентивирусных векторов. Методами клеточного репрограммирования нами получены несколько линий индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (ИПСК) из ES-клеток, из соматических клеток – клеток кожи, клеток амниотической жидкости и др. Используется метод направленной дифференцировки ИПСК в нейральные клетки, первичные половые клетки и др. В настоящий момент осваиваются новейшие методы редактирования генома при помощи системы CRISPR-Cas9 и системы трансгенеза Sleeping Beuty.

На протяжении 20 лет в лаборатории разрабатываются, внедряются и совершенствуются тканеинженерные конструкции для регенеративной медицины.

Одним из направлений работы коллектива является создание моделей патологических состояний и тканевых дефектов на лабораторных животных. В данных моделях мы отрабатываем новые способы лечения различных патологий с использованием биотехнологических и клеточных препаратов.



Перечень основных методов:

  • Культивирование in vitro клеток человека и животных
  • Разделение клеточных популяций методом флуоресцентного и иммуномагнитного сортинга
  • Анализ клеточных популяций методом проточной флуоресценции
  • Микроскопирование (в т.ч. флуоресцентное) клеточных препаратов, гистологических препаратов, кариологических препаратов
  • Иммуногистохимическое (ИГХ)/ иммуноцитохимическое выявление маркеров дифференцировки клеток и тканей
  • Криоконсервирование (замораживание и криохранение) клеточных образцов
  • Определение уровня экспрессии генов методом ОТ-ПЦР в реальном времени
  • Иммуноферментный анализ (ИФА)
  • The enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) *
  • Мультиплексный ИФА-анализ *
  • Western-Blot анализ *
  • Анализ экспрессии генов, измерение копийности генов, определение редких фрагментов методом цифрового ПЦР *
  • Прижизненное микроскопирование (в т.ч. флуоресцентное) клеточных культур, цейтраферная съемка *
  • Конфокальная микроскопия *
    * Часть методов реализована с использованием оборудования расположенного на базе лаборатории регенеративной медицины в РНИМУ им. Пирогова



Оборудование, поддерживающее методы, используемые в работе

  • Ламинарные шкафы 2 уровня биозащиты (HERAsafe, Joan)
  • СО2-инкубаторы SANYO MCO, в том числе один мультигазовый, т.е. с функцией подавления кислорода.
  • Просмотровые микроскопы Zeiss
  • Счетчики клеток Bio-Rad TC-20
  • Система ПЦР в реальном времени
  • Термоциклер для амплификации нуклеиновых кислот MINI Cycler
  • Клеточный флуоресцентный сортер S3е (Bio-Rad)
  • Магнитосортер
  • Проточный цитофлуориметр CellLabQuanta SC (Вeckman Coulter)
  • Инвертированный флуоресцентный микроскоп Olympus
  • Инвертированный флуоресцентный цифровой микроскоп Keyence BZ900
  • Просмотровые инвертированные микроскопы (Olympus, Zeiss)
  • Цифровые фотокамеры
  • Низкотемпературный холодильник Haier
  • Криохранилища Thermo Locator 6 plus
  • Планшетный фотометр Start Fax
  • Прочее оборудование: Биофотометр, твердотельные термостаты, ультрацентрифуги, пипетки, шейкеры в комплекте

Рис. 1. Работа с культурой клеток в ламинарном боксе 2-го уровня биобезопасности.


Рис. 2. Инвертированный флуоресцентный микроскоп Olympus


Рис. 3. Инвертированный флуоресцентный цифровой безокулярный микроскоп Keyence


Рис. 4. Мультигазовый СО2-инкубатор SANYO MCO (слева) и термостат (справа).


Рис. 5. Криохранилища Thermo Locator plus с коллекцией клеточных линий


Рис. 6. Проточный цитофлуориметр CellLabQuanta SC (Вeckman Coulter)